一种高特异性的改良降落PCR(英文)
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张贵星 袁保梅 许培荣 王建民 薛乐勋 郑州大学医学院生物工程实验室 郑州大学医学院生物工程实验室 郑州大学医学院生物工程实验室 郑州大学医学院生物工程实验室 郑州大学医学院生物工程实验室
【摘要】为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliellabardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果显示,使用普通Taq酶PCR,普通PCR程序产生200bp,500bp和1272bp长的三条带,而TD PCR程序仅克隆出1272bp的特异带;利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR,在TD PCR泳道中仅有1272
【关键词】 降落PCR PCR特异性 PfuDNA聚合酶
【基金】国家九五科技攻关项目(96 901 05 189) 河南省重大科技攻关项目(0122032500)~~
【分类号】Q503
Pokymerasechainreaction (PCR) ,asaninvitroratherthaninvivobasedDNAampkificationprocedure ,hassofarbecomeapopukarandveryimportantto
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摘 要：为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性，设计了一种改良的降落PCR程序，并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliella bardawiJ中提取基因组DNA作为PCR模板，使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶，运用普通PCR和降落PCR程序，扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列，并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果显示，使用普通Taq酶PCR，普通PCR程序产生2印bp，500bp和1272bp长的三条带，而TD—PCR程序仅克隆出1272bp的特异带；利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR，在TD—PCR泳道中仅有1 272bp一条带，而普通PCR除了1272bp的特异带外，还出现一条500bp的非特异带.无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu，改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性，类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段，或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.
关键词：降落PCR；PCR特异性；Pfu DNA聚合酶
中图分类号：Q781
文献标识码：A
文章编号：1007—7847(2002)04-0314-04
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